Hur man gör en TAE-buffert i några steg

TAE-buffert är en lösning som består av Tris-bas, ättiksyra och EDTA (Tris-acetat-EDTA). Det är historiskt den vanligaste bufferten som används för agarosgelelektrofores i analyserna av DNA-produkter som härrör från PCR-amplifiering, DNA-reningsprotokoll eller DNA-kloningsexperiment.

Denna buffert har en låg jonstyrka och låg buffertkapacitet. Det passar bäst för elektrofores av stora (> 20 kb) bitar av DNA och kommer att behöva bytas ut ofta eller recirkuleras under längre (> 4 h) gelkörningstider.

Med det i åtanke kanske du vill överväga flera partier av bufferten.

Eftersom bufferten är lätt att göra och stegen kan utföras snabbt, bör det vara särskilt tidskrävande eller svårt att dra av mer än ett parti i taget. Med hjälp av instruktionerna nedan ska det ta bara 30 minuter att ta TAE-bufferten. Så här:

Förbered en stamlösning av EDTA

En lösning av EDTA (etylendiamintetraättiksyra) framställs före tidpunkten. EDTA kommer inte att gå helt in i en lösning tills pH-värdet är inställt på ca 8. 0. För en 500 ml stocklösning av 0,5 M EDTA väger 93,0 g EDTA-dinatriumsalt (FW = 372. 2 ). Lös i 400 ml avjoniserat vatten och justera pH med natriumhydroxid (NaOH). Lös upp lösningen till en slutlig volym på 500 ml.

Pipa upp en lagerlösning av TAE

Gör en koncentrerad (50x) stamlösning av TAE genom att väga ut 242 gram Tris-bas (FW = 121. 14) och lösa upp den i ca 750 ml avjoniserat vatten.

Lägg försiktigt 57. 1 ml is och 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0). Därefter justeras lösningen till en slutlig volym på 1 liter. Denna stamlösning kan förvaras vid rumstemperatur. PH för denna buffert är inte justerad och bör vara ca 8. 5.

Förbered en arbetslösning av TAE

Arbetslösningen av 1x TAE-buffert görs genom att helt enkelt späda stamlösningen med 50x i avjoniserat vatten.

Slutliga lösningskoncentrationer är 40 mM. Trisacetat och 1 mM EDTA. Bufferten är nu klar för användning vid körning av en agarosgel.

Vad du behöver för bufferten

Eftersom TAE-bufferten endast kräver en snabb och enkel uppsättning instruktioner är mängden material som behövs för det inte överdrivet. Du behöver bara EDTA dinatriumsalt, Tris-bas och isättika.

Att göra bufferten kräver också en pH-mätare och kalibreringsstandard, beroende på vad som är lämpligt. Du behöver också 600 milliliter och 1500 milliliter bägare eller kolvar samt graduerade cylindrar. Slutligen behöver du avjoniserat vatten, rörstänger och rörplattor.

Förpackning

Var planerar du att göra bufferten - på en skolplats, en arbetsplats eller en annan plats, till exempel ditt hem?Kontrollera inventariet innan du börjar se till att du har alla ovanstående material för TAE-bufferten.

Om du hellre inte behöver betala för material rekommenderas att du väljer att göra bufferten utanför ditt hem. Du kan enkelt beställa materialet du behöver online eller besöka en specialaffär för dem.