Hur man gör fosfatbuffrad saltlösning (PBS)

PBS (fosfatbuffrad saltlösning) är en vanligt använd buffert för immunohistokemisk färgning och används vanligtvis i biologisk forskning. Osmolaritets- och jonkoncentrationerna av lösningarna motsvarar människokroppen (isotonisk).

PBS är en vattenbaserad saltlösning innehållande natriumvätefosfat, natriumklorid och i vissa fall kaliumklorid och kaliumdihydrogenfosfat.

Immunfluorescerande färgning för IHC

Immunfluorescerande färgning var den första immunohistokemiska (IHC) färgmetoden. Med grundligheten av antigen-antikroppsbindningsreaktionen blir antigener synliga med användning av fluorescensfärger när de är konjugerade med antikroppar. Processen händer när den aktiveras av spännande ljus av en specifik våglängd under ett fluorescerande mikroskop. Immunohistokemi hänför sig till processen att detektera antigener (t.ex. proteiner) i cellerna i en vävnadssektion med användning av antikroppsprincipen som specifikt binder till antigener i biologiska vävnader.

Användning av fosfatbuffrad saltlösning (PBS)

Fosfatbuffrad saltlösning har många användningsområden eftersom den är isotonisk och giftfri för de flesta celler. Det kan användas för att späda ämnen och används för att skölja behållare som innehåller celler. PBS kan användas som utspädningsmedel i metoder för att torka biomolekyler eftersom vattenmolekyler inom den kommer att struktureras kring substansen (t.ex. protein) att "torkas" och immobiliseras till en fast yta.

Den tunna filmen av vatten som binder till ämnet förhindrar denaturering eller andra konformationsförändringar. Karbonatbuffertar kan användas för samma ändamål men med mindre effektivitet. PBS kan också användas för att ta ett referensspektrum vid mätning av proteinadsorptionen i ellipsometri.

Framställning av PBS

Det finns många olika sätt att förbereda PBS.

Vissa formuleringar innehåller inte kalium, medan andra innehåller kalcium eller magnesium. Buffertreceptet nedan, vilket är relativt enkelt, är för 10X PBS stamlösning (0. 1M). Ett alternativ att lägga till Tween finns också. Hela processen tar cirka 10 minuter.