Betydelse av specifik aktivitet i proteinisolering

Särskild aktivitet är en term som används för att mäta reaktionshastigheten för ett enzym med ett substrat.

Specifik enzymaktivitet (specifik aktivitet för kort) är ett mått på enzymrenhet och citeras som enheter / mg . Värdet blir större eftersom ett enzympreparat blir renare eftersom mängden protein (mg) vanligtvis är mindre, men reaktionshastigheten blir densamma (eller kan öka på grund av minskad störning eller avlägsnande av hämmare).

Särskild aktivitet: Mätning av enzymkinetik

Som en bit av bakgrund är enzymer proteiner som fungerar som katalysatorer för att minska mängden aktiveringsenergi för att en reaktion ska uppstå. Aktiveringsenergi är den energi som krävs för att få reaktioner "startade" eftersom många reaktioner inte sker mycket snabbt (eller inträffar alls) om de är termodynamiskt möjliga.

Enzymer katalyserar specifika reaktioner på en viss plats (känd som den aktiva platsen) där reaktanterna binder och reagerar på att generera produkterna. Substrat har aktiva platser som endast är specifika för dem så att inga andra ämnen binder eller reagerar på samma plats. Som ett lås och en nyckel, kommer varje enzym att katalysera endast en specifik reaktion (med några undantag).

Särskild aktivitet används i proteinisoleringsmetoder för att ange reningsprocenten. Det är viktigt att känna till denna enhet när man köper enzymer för att ange exakt hur mycket av det rena enzymet du får.

- ^ ->

När man mäter enzymkinetik (reaktionshastigheten för ett enzym med ett substrat eller en yta) definieras den specifika aktiviteten som mängden substrat som enzymet omvandlar (reaktioner katalyserade) per mg protein i enzympreparatet, per tidsenhet.

Ett exempel på specifik aktivitet skulle vara:

• Den isolerade enzymets specifika aktivitet mättes vid 150 umol / min / mg protein före rening och 800 umol / min / mg efter rening.

Särskild aktivitet är en viktig åtgärd av enzymrenhet. Olika partier av ett rent enzym bör ha samma värden och det kommer ofta att spädas en enzymlösning med samma specifika aktivitetsvärden även om det kommer att finnas olika enzymaktivitetsvärden. Detta beror på att räknaren (enheter / ml) och nämnare (mg / ml) påverkas lika mycket vid beräkningen av specifik aktivitet.

Särskild aktivitet är väldigt annorlunda än aktivitet, men beräkningen av specifik aktivitet är fortfarande beroende av aktivitetsvärdet. Detta innebär att det angivna specifika aktivitetsvärdet också kommer att vara beroende av enzymenhetsdefinitionen.

Grupper av enzymer som har lägre än förväntat specifikt aktivitetsvärde kan innehålla enzymmolekyler som har blivit förändrade eller blandade med föroreningar.

Faktorer som påverkar enzymaktivitet

Det är möjligt att ett enzym kan ha olika uppmätta aktivitetsvärden när de mäts i olika laboratorier (det vill säga verkliga skillnader i uppmätt aktivitet, inte uppenbara skillnader som orsakas av användningen av olika enhetsdefinitioner).

Hur en analys utförs (testmetoden för att bestämma renheten hos enzymer) kommer att påverka de rapporterade aktivitetsvärdena. Exempelvis är enzymer i allmänhet mer aktiva mellan temperaturer av 37 grader Celsius jämfört med vid 20 grader Celsius, så om en analys utförs vid 21 grader Celsius, kommer värdena att skilja sig från analyserna utförda vid en temperatur av 32 grader Celsius (typiskt , analyser utförs vid en temperatur mellan 20-37 grader Celsius).

Således skulle definitionen av enzymenheten uttryckas bättre som: 1 enhet (U) är mängden enzym som katalyserar reaktionen av 1 nmol substrat per minut under standardbetingelser.