Hur man gör TBE-buffert i 3 enkla steg

TBE-buffert är en buffertlösning som består av Tris-bas, borsyra och EDTA (eller Tris-borat-EDTA totalt). Denna buffert används ofta för agarosgelelektrofores vid analys av DNA-produkter som erhålles från PCR-amplifiering, DNA-reningsprotokoll eller DNA-kloningsexperiment.

TBE-buffert är särskilt användbar för separation av mindre DNA-fragment (MW <1000), såsom små produkter med restriktionsenzym digereringar.

TBE har en större bufferkapacitet och kommer att ge skarpare upplösning än TAE-bufferten. TAE-buffert är en lösning som består av Tris-bas, ättiksyra och EDTA (Tris-acetat-EDTA).

TBE är i allmänhet dyrare än TAE och hämmar DNA-ligas, vilket kan orsaka problem om efterföljande DNA-rening- och ligeringsteg är avsedda. Med de tre enkla stegen som följer kan du lära dig hur du gör TBE-buffert. Det ska ta mer än 30 minuter att skapa den här bufferten. Så här:

Förbered en lagerlösning av EDTA

En lösning av EDTA (etylendiamintetraättiksyra) bör framställas före tidpunkten. EDTA kommer inte att lösas fullständigt till dess pH-värdet är inställt till ca 8. 0. För en 500 ml lösning av 0,5 M EDTA väger 93,05 gram EDTA-dinatriumsalt (FW = 372. 2). Lös det sedan i 400 ml avjoniserat vatten och justera pH med NaOH. Därefter fyller lösningen upp till en slutlig volym på 500 ml.

Förbered en stamlösning av TBE

Gör en koncentrerad (5x) stamlösning av TBE genom att väga 54 g Tris-bas (FW = 121. 14) och 27. 5 g borsyra (FW = 61,83) och upplöses båda i cirka 900 ml avjoniserat vatten. Tillsätt sedan 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) och justera lösningen till en slutlig volym på 1 liter.

Denna lösning kan förvaras vid rumstemperatur men en fällning kommer att bildas i äldre lösningar. Förvara bufferten i glasflaskor och kassera om en fällning har bildats.

Förbered en arbetslösning av TBE

För agarosgelelektrofores kan en TBE-buffert användas vid en koncentration av 0. 5x (1: 10 utspädning av det koncentrerade materialet). Tillsätt stamlösningen med 10x i avjoniserat vatten. Slutliga lösliga koncentrationer är 45 mM Tris-borat och 1 mM EDTA. Bufferten är nu klar för användning vid körning av en agarosgel.

Vad du behöver

För att göra TBE-buffert behöver du bara fyra ämnen. De återstående föremålen i denna lista är utrustning. De fyra ämnen som krävs är EDTA-dinatriumsalt, Tris-bas, borsyra och avjoniserat vatten.

När det gäller utrustning behöver du en pH-mätare och kalibreringsstandard, i förekommande fall. Förutom det behöver du 600 milliliter och 1500 milliliter bägare eller kolvar. Att avrunda dina utrustningsbehov är graduerade cylindrar och rörstänger och rörplattor.

Kontrollera inventariet i laboratoriet du ska använda för att se till att du har allt du behöver innan du börjar. Ingenting är sämre än att behöva stanna i mitten av att förbereda en lösning för att du har slutfört rätt material.

Om ditt labb är på skolan eller på din arbetsplats, kolla med den ordinarie personalen för att se att de har alla föremål på lageret. Om du gör det kan du spara tid och energi i slutet.